阿立新A试剂盒

区分ELISA试剂盒的方法：
一：选定一个检测范围内的浓度做多孔重复，可看出平行性好不好。即板内CV值的大小，此操作时需求当心加样的性。对一些制造较粗糙的试剂盒来说，板间CV值是较大的。
二：可选用已知浓度的重组细胞因子，稀释到检测范围内作为样本参加，看检测的性。
三：对用待测目标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的小浓度稀释，可测出灵敏度，主张5个复孔以上才有含义。一般厂家以20个复孔做出的成果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述，也可判别出所购试剂盒是否有夸张之说。
四：如果有相同目标的试剂盒，可用对方的标准品作为样本，分别参加各自的试剂盒做检测，以检测试剂盒的真实性，性。如其中一种是的，比较牢靠的话，可作为标准来验证另一试剂盒的程度。

操作步骤

　　1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

　　200ng/L

　　5 号标准品

　　150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　100ng/L

　　4 号标准品

　　150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　50ng/L

　　3 号标准品

　　150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　25ng/L

　　2 号标准品

　　150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　12.5ng/L

　　1 号标准品

　　150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

　　4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同 3。

　　8. 洗涤：操作同 5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

　　10 分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

样本的收集：

　　1、血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固 10-20 分钟，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

　　2、血浆：应根据标本的要求选择 EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

　　3、尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　4、胸腹水：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　5、脑脊液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　6、唾液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　8、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　9、蜂蜜：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　10、全血：用含有抗凝剂的无菌管收集，立即轻轻摇动，来回轻轻颠倒数次，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。