胸肾表达趋化因子试剂盒

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

60 ng/L5 号标准品150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

30 ng/L4 号标准品150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

15 ng/L3 号标准品150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

7.5 ng/L2 号标准品150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

3.75 ng/L1 号标准品150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，

然后再加待测样品 10µl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算:

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，

即为样品的实际浓度。

注意事项

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。

7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定以酶标仪读数为准.

8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1. 试剂盒保存：;2-8℃。

2. 有效期：6 个月

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中类重组ph20(spam1)水平。用纯化的类重组ph20(spam1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类重组ph20(spam1)，再与HRP 标记的类重组ph20(spam1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的类重组ph20(spam1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中人类重组ph20(spam1)浓度。

试剂盒组成：

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 ; 2 酶标试剂 6ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 ; 4 样品稀释液 6ml×1 瓶

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 ; 6 显色剂B 液 6ml×1/瓶

7 终止液 6ml×1 瓶; 8 标准品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶; 10 说明书 1 份

11 封板膜 2 张; 12 密封袋 1 个

标本要求

1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)活性。

影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。
elisa试剂盒价格具有以下优点：
1)快速： 仅需传统夹心法ELISA 1/3的操作时间，1小时即可完成整个试验流程;
2)简单： 只需1个洗涤步骤;
3)灵活： 可单或同时检测总蛋白及磷酸化蛋白，可在同一板上检测不同的靶蛋白;
4)灵敏： 达到甚至超过行业标准，且结果一致性良好;
5)兼容： 常规比色法检测，实验室常规酶标仪读数;
微量蛋白检测系列：白介素类试剂盒 TNF类试剂盒 VEGF类试剂盒 肾损伤类试剂盒
诊断相关小分子检测系列：皮质醇类试剂盒 HCY类试剂盒 T3,T4类试剂盒
食品安全小分子检测系列：庆大霉素ELISA检测试剂盒 三聚氰胺ELISA检测试剂盒 四环素ELISA检测试剂盒 黄曲霉毒素ELISA检测试剂盒
抗体检测系列：链球菌溶血素o抗体ELISA检测试剂盒 AQP-Ab类试剂盒 HINI试剂盒
特种蛋白检测：近十个种属的白蛋白、球蛋白ELISA检测试剂盒