热休克蛋白40试剂盒

影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。

Elisa试剂盒详情：
样本：血清、血浆、组织匀浆等液体样本
标记物：血清、血浆、组织匀浆等
适应物种：详见说明书
应用：可用于科研实验,不用于临床治疗
检测方法：一步法、夹心法、酶联吸附法等
储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）。
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）。
检测方法：酶联

操作步骤

　　1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

　　200ng/L

　　5 号标准品

　　150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　100ng/L

　　4 号标准品

　　150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　50ng/L

　　3 号标准品

　　150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　25ng/L

　　2 号标准品

　　150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　12.5ng/L

　　1 号标准品

　　150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

　　4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同 3。

　　8. 洗涤：操作同 5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

　　10 分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

ELISA【实验原理】
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
ELISA试剂盒产品用途：

【灵敏度高】：由于抗体联结上了酶，因此借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，从而使检测水平接近放射测定法。

【专一性强】：抗原和抗体的反应是专一反应，而酶技术以反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的反应特性并无多大差别。

保质期： 2-8℃保存，切勿冷冻，有效期为六个月
样本的收集：

　　1、血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固 10-20 分钟，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

　　2、血浆：应根据标本的要求选择 EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

　　3、尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　4、胸腹水：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　5、脑脊液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　6、唾液：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　8、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　9、蜂蜜：用无菌管收集，2-8℃条件离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　10、全血：用含有抗凝剂的无菌管收集，立即轻轻摇动，来回轻轻颠倒数次，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。