肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1)试剂盒微量法

肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1)试剂盒微量法说明书

微量法 100管/96样 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

商品属性：

产品名称：肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1)试剂盒微量法

货号：LZ-S01201

规格 : 100管/96样

测试方法:微量法

产品分类：脂肪酸代谢系列

发货地：上海

测定意义:

肉毒碱棕榈酰转移酶是存在于线粒体内膜的一类酰基转移酶。可逆地催化从酰基辅酶A将酰基转移至L-肉毒碱的反应，在转运脂肪酸通过线粒体内膜的过程中起重要作用。                         

测定原理:

基于肉碱和脂酰辅酶A在丙二酰辅酶A存在与否的条件下，通过肉碱脂酰转移酶(CPT-I)的作用，产生脂酰肉碱，并释放出巯基辅酶A(COA-SH)，与Ellman试剂DN-TB反应后，产生黄色的TNB。通过其吸收峰值得变化（412nm），来定量分析CPT-1的活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂的组成和配制:

试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：液体 20mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂三：液体 1.5mL×1 支，-20℃保存；

试剂四：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存；

试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；

样本的前处理：

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：

① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

② 将匀浆液于 600g，4℃离心 5min。

③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。

④ 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 CPT-1（此步可选做）。

⑤ 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），用于线粒体 CPT-1 测定。

生化检测试剂盒操作步骤：

一、‌准备工具和环境‌：确保操作台面干净、整洁，这是进行科学实验的步。

‌二、‌仔细阅读说明书‌：这是使用试剂盒的基础，说明书包含了所有必要的信息和操作指南。

三、样本采集‌：按照说明书的指导，正确采集样本。不同类型的检测可能需要不同类型的样本，如血液、唾液或鼻涕等。

‌四、样本混合‌：将样本与试剂小心混合，注意轻柔操作，避免产生泡沫，以确保检测的准确性。

‌五、‌等待反应‌：混合后，耐心等待试剂盒的反应，这个时间可以用来进行其他活动，但不要着急，因为好的结果值得等待。

六、结果判读‌：时间到后，仔细判读结果。试剂盒通常会有明确的指示，告诉你如何根据显示的线条或颜色来判断结果。 

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注意事项:

①加入试剂的顺序应一致,以所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。